梅裏(li)埃酵母菌鑒(jian)定卡相關(guan)藥(yao)敏試驗(yan)方(fang)法(fa)介紹

　　梅(mei)裏(li)埃酵母菌鑒(jian)定卡在(zai)實(shi)驗室(shi)中很常見(jian)，酵母菌作為壹類重要的真(zhen)菌，被廣泛應(ying)用於人(ren)類的(de)生產(chan)活動(dong)中。微基生物(wu)專註(zhu)微(wei)生物(wu)多(duo)樣(yang)性(xing)研究(jiu)，為高校(xiao)、醫院、研究(jiu)所(suo)等(deng)單位(wei)提(ti)供(gong)科研服務。不(bu)僅(jin)可以檢測(ce)土壤、水(shui)體、糞(fen)便(bian)、腸道(dao)內容(rong)物(wu)等樣(yang)本(ben)中混合微生物(wu)的種(zhong)類及(ji)豐度(du)，而(er)且(qie)還(hai)可以提供(gong)細(xi)菌、真(zhen)菌等純菌的菌種鑒(jian)定服務。

 

　　梅裏(li)埃酵母菌鑒(jian)定卡菌種鑒(jian)定壹般(ban)是提(ti)取純菌A的基因(yin)組(zu)DNA，然後(hou)PCR擴增(zeng)16srDNA片(pian)段，之後(hou)通過(guo)壹代測(ce)序(xu)或三(san)代測(ce)序(xu)檢測(ce)16SrDNA的全(quan)長，與國(guo)際(ji)上的數據(ju)庫進行比對，默(mo)認(ren)選(xuan)取比對結果中相似性(xing)高的(de)物(wu)種分(fen)類信(xin)息(xi)，之後(hou)構(gou)建(jian)系統發(fa)育(yu)樹，然後(hou)得出(chu)樣(yang)本(ben)A與XX物(wu)種的(de)相(xiang)似(si)性(xing)高。

 

　　操(cao)作規(gui)程：

 

　　1、取血平(ping)板上(shang)的(de)單個(ge)菌落制片，做(zuo)革蘭(lan)氏(shi)染(ran)色(se)鏡檢證實(shi)為真(zhen)菌。

 

　　2、從冰箱取出(chu)鑒(jian)定卡（YBC），待恢(hui)復(fu)至室(shi)溫後(hou)取出(chu)編號，放(fang)到(dao)卡片架(jia)上。

 

　　3、濁(zhuo)度計(ji)校(xiao)零及(ji)100％，用(yong)裝(zhuang)有結晶紫(zi)的(de)試管(guan)調(tiao)零(ling)，用0.45％的鹽(yan)水(shui)管調(tiao)100％。

 

　　4、挑(tiao)取經(jing)純化的(de)單(dan)個菌落，用(yong)濃(nong)度為0.45％鹽(yan)水，配制成2麥氏單位(wei)濃(nong)度(du)的菌懸液(ye)。

 

　　5、放(fang)入(ru)填(tian)充(chong)箱內填(tian)充(chong)，待填(tian)充(chong)完成後用塞(sai)子封(feng)口，檢查和排除氣。

 

　　6、把(ba)卡片放(fang)在(zai)30℃的孵(fu)箱內孵(fu)育(yu)18～24小時(shi)，然後(hou)放(fang)入(ru)閱讀(du)箱內，儀器(qi)自(zi)動(dong)讀(du)卡。

 

　　7、同時(shi)做手(shou)工藥(yao)敏試驗(yan)：有2種(zhong)方法：

 

　　8、配制0.5麥氏(shi)單位(wei)濁(zhuo)度該(gai)菌液，用(yong)棉(mian)簽均(jun)勻塗於念珠(zhu)菌藥(yao)敏平(ping)板上(shang)，待5min後(hou)貼相應(ying)藥(yao)敏紙片，35℃培(pei)養24～48小時，讀(du)取低抑(yi)菌濃度(du)（MIC）並(bing)報(bao)告(gao)。

 

　　9、用(yong)0.9％生理鹽(yan)水(shui)配制0.5麥氏(shi)單位(wei)濁(zhuo)度該(gai)菌液，再(zai)用(yong)0.9％生理鹽(yan)水(shui)1﹕1稀(xi)釋(shi)，吸取0.5ml菌懸液(ye)到(dao)念球(qiu)菌藥(yao)敏平(ping)板，用(yong)棉(mian)簽均(jun)勻塗布，棄(qi)去多(duo)余的菌懸液(ye)，放(fang)置(zhi)5分(fen)鐘後貼藥(yao)片，35℃培(pei)養18～24h，測(ce)量(liang)抑(yi)菌環直(zhi)徑並(bing)報(bao)告(gao)。